背景:

       由于转移酶、尤其是激酶的生理相关性、多样性和普遍存在，它们成为生化和医学研究中最重要并被广泛研究的一类酶家族。许多目前可用的激酶测定使用在反应期间消耗大量ATP的酶而运行良好，但对检测ATP量的少量变化而言则不够灵敏，这限制了具有低ATP周转率的激酶（例如生长因子受体激酶）的检测，因此需要一种高灵敏度测定方法来筛选低活性激酶。

概述:

      Rhinogen^® Kinase-Turbo™ ADP激酶活性检测试剂盒是一种发光型ADP检测试剂盒，它提供了一种通用、均质、高通量的筛选方法通过量化激酶反应过程中产生的ADP量来测量激酶活性。Rhinogen^® Kinase-Turbo™ ADP激酶活性检测试剂盒可用于监测几乎所有能产生ADP的激酶的活性。Rhinogen^® Kinase-Turbo™ ADP激酶活性检测试剂盒可检测使用0-10μM ATP的酶（如激酶或ATP酶）的活性。ADP激酶测定在多孔板中进行，可在低至5μl的反应体积内检测激酶活性。

图1. Kinase-Turbo™ ADP激酶活性检测试剂盒原理

         检测分两步进行：
        1）首先，在激酶反应后，加入等体积的First reagent试剂以终止激酶反应并耗尽剩余的ATP。
        2）其次，加入Second reagent试剂，同时将ADP转化为ATP，并利用荧光素酶/荧光素反应测量新生成的ATP。产生的发光信号用酶标仪测量。通过ATP到ADP的转换曲线，可将发光值与ADP浓度相关联。

图2. Kinase-Turbo™ ADP激酶活性检测试剂盒检测流程图

          这种检测方法的灵敏度足以检测到极低量的ADP，并可在含有10μM ATP（图3）和1μMATP（图4）的反应中以线性方式检测生成的ADP。所产生的发光信号与所产生的ADP浓度成正比，并与激酶活性相关。

图3. ADP激酶检测的线性情况（10μM）

图4. ADP激酶检测的线性情况（1μM）

试剂包装:

         Rhinogen^® Kinase-Turbo™ ADP 激酶活性检测试剂盒包装规格如下：
         注：可用于96 孔板（25μl：25μl：50μl），足够进行200T

        Rhinogen^® Kinase-Turbo™ ADP 激酶活性检测试剂盒具体组分如下：

应用:

        Rhinogen^® Kinase-Turbo™ ADP激酶活性检测试剂盒几乎可以使用任何激酶和底物组合，而且不需要放射性标记的成分或抗体。激酶底物可以是肽、蛋白质、脂质或糖。由于Rhinogen^® Kinase-Turbo™ ADP激酶活性检测试剂盒测定法灵敏度高，基本上可用于所有激酶，尤其是酶周转率低的激酶，如生长因子受体酪氨酸激酶。因此，该检测法是高通量筛选的理想选择，因为少量的酶和较低的ATP-ADP转化率就能产生较高的信号-背景比。
       Rhinogen^® Kinase-Turbo™ ADP激酶活性检测试剂盒可产生稳定的发光信号，并在各种检测条件下提高性能。加入Second reagent后，荧光素酶反应产生的信号可稳定持续3小时以上。由于稳定性更强，因此不需要配备注射器的荧光测定仪，也可对多个平板进行批量处理。此外，荧光素酶与First reagent试剂和Second reagent检测试剂专有配方的独特组合，使其发光效果比其他基于荧光素酶或荧光的检测方法更不易受文库化合物的干扰。

产品特性:

       1.动态范围大：在ATP与ADP的转换率较低时，信号与背景的比率较高，因此可以使用较少量的酶；
       2. 灵敏度高：检测1nmol ADP的灵敏度是背景灵敏度的2倍以上；
       3. 通用检测：可使用任何激酶和激酶与底物的组合，包括肽、蛋白质、脂质和糖底物；
       4. 正相关：检测信号随生成物的增加而线性增加；
       5. 基于发光的ADP检测：减少化学物质对整个检测过程的干扰；
       6. 批量平板处理：发光信号高度稳定，3小时后信号增加比例小于20%；
       7. 均一、稳健、无放射性的检测方法。

保存条件:

       采用干冰运输，收到产品后请立即置于-20℃及以下条件下储存。使用前，先将所有组分置于室温条件下完全解冻混匀。未使用完的组分进行分装，并置于-20℃及以下条件下储存。First reagent和Second reagent可在室温（22℃）下放置24小时而不会失去信号。