单克隆抗体药物的体外生物学活性检测是对抗体类药物有效成分以及效价进行测定，是单抗药物质量控制中非常重要的一环，生物学活性检测贯穿蛋白药物整个生命周期，从早期靶点的发现，抗体的筛选，再过渡至CMC阶段进行生产、临床应用，到最后上市，都会涉及生物活性的分析。因此，选择高效、快速、准确的生物活性测定方法是极其重要的。
下面我们以抗体药物为例，说明生物学活性方法主要包括哪些。
1）细胞增殖抑制法
MTT法
CCK-8法
刃天青法
ATP法
ATP发光法是利用萤火虫荧光素/荧光素酶与细胞内的ATP发生氧化反应而产生光子，通过检测光度来得到ATP含量，从而分析细胞活性与增殖情况。具有灵敏度高、操作便捷等优点。
报告基因法是通过重组抗体与相应靶点结合后，测定信号通路变化效应的活性评价方式。一般在细胞株难于获得，以及杀伤中和或增殖抑制法产生量效曲线的信噪比不理想时，可基于对该通路的现有了解，将携带抗体作用靶点反应元件与报告基因的质粒稳定转染细胞后，通过重组抗体与相应靶点的作用，启动报告基因的表达来检测重组抗体的生物学活性。
单抗类药物的ADCC活性检测的传统方法是外周血单核细胞（PBMC）或自然杀伤细胞（NK）对靶细胞的杀伤实验，这种方法细胞分离难度大、实验操作复杂并且变异性大。近年来国内外建立了基于报告基因法的ADCC活性检测方法，完善了此类药物的活性检测方法。
除了检测抗体对细胞的增殖和毒性作用外，还可以通过ELISA法测定靶细胞与抗体及刺激因子共培养后分泌的细胞因子来评价抗体的生物学活性。例如抗IL-17单抗可以根据其抑制IL-17诱导靶细胞释放IL-6或GROα等细胞因子的能力来评价其生物学活性。将IL-17和IL-17单抗以及靶细胞接种到96孔板上，培养过夜。再通过ELISA法定量测定细胞上清液中分泌的细胞因子的含量，细胞因子的含量与抗体活性成反比。
基于SPR的BIA法测定周期短；样品消耗量低，一般仅有微克级；另外，无需预先标记荧光、二抗的分子，避免了标记基团对分子构象的影响，从而反映出分子间真实的结合性质；该技术除了获取一般的亲和力信息外，还能够给出对阐述分子间结合机理更为宝贵的动力学信息。SPR 技术已广泛应用于小分子制药和生物制药领域，在抗体分析领域，其应用主要包括：
随着技术的进步，药物体外生物学活性检测手段越来越多，比如均相时间分辨荧光、Alpha技术、荧光染料标记法等。一种药物往往可通过多种方法进行体外活性的测定，例如：以VEGF或VEGFR2为靶点的单抗类药物的生物活性测定方法包括增殖抑制法和报告基因法。一种被广泛应用的方法是人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell,）增殖抑制法，但是这种方法变异性大，重复性差。一种基于VEGF的主要作用机理VEGF-VEGFR-NFAT途径的报告基因法，该方法通过检测荧光素酶化学发光信号对其生物学活性进行检测，可以作为HUVEC增殖抑制法的可行补充方法，并用于其它种类的抗VEGF抗体的效力测定。
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参考文献